Oksalo rūgšties kiekio nustatymas vaisiuose ir daržovėse efektyviosios skysčių chromatografijos (HPLC) metodu
1. Eksperimentinis principas ir metodo projektavimas
Oksalo rūgštis, kaip įprasta organinė rūgštis vaisiuose ir daržovėse, tiesiogiai veikia maisto skonį ir maistinę vertę. Šiame eksperimente naudojama atvirkštinės fazės efektyvioji skysčių chromatografija (RP-HPLC). Rūgštinės mobiliosios fazės sąlygomis oksalo rūgštis nuo trukdančių medžiagų atskiriama iki bazinės linijos naudojant C18 chromatografinę kolonėlę. Kiekybinei analizei, pagrįstai oksalo rūgšties molekulių karboksilo grupių UV absorbcijos charakteristikomis, naudojamas ultravioletinis detektorius, nustatytas ties 210 nm.
2. Standartinė kreivė ir mėginio paruošimas
Standartiniams tirpalams ruošti naudojamas gradientinio skiedimo metodas: tiksliai pasverkite 25,0 mg oksalo rūgšties dihidrato ir praskieskite iki 25 ml itin grynu vandeniu, kad gautumėte 1 mg/ml koncentraciją turintį standartinį tirpalą. Šis tirpalas nuosekliai skiedžiamas į standartinių tirpalų seriją, kurių koncentracija yra 50, 100, 200, 400 ir 800 µg/ml, kiekvieną koncentraciją suleidžiant tris kartus.
Mėginio paruošimui naudojama mikrobangų krosnelė: pasverkite 5,00 g vaisių/daržovių homogenato, įpilkite 10 ml 0,1 mol/l druskos rūgšties tirpalo, 10 minučių apdorokite mikrobangų krosnelėje 60 °C temperatūroje, filtruokite per 0,45 µm membraninį filtrą ir surinkite filtratą analizei.
3. Chromatografinių sąlygų optimizavimas
Mobilioji fazė yra 0,01 mol/l kalio divandenilio fosfato buferio (pH 2,5) ir acetonitrilo (95:5) sistema, kurios srauto greitis yra 0,8 ml/min., o kolonėlės temperatūra – 35 °C. Pakoregavus acetonitrilo proporciją, matyti, kad kai organinės fazės kiekis viršija 10 %, oksalo rūgšties sulaikymo laikas sutrumpėja iki mažiau nei 3 minučių, tačiau atsiranda didžiausia „uodegų“ koncentracija. Galutinėmis optimizuotomis sąlygomis oksalo rūgšties sulaikymo laikas yra 4,2 minutės, todėl pasiekiamas visiškas atskyrimas nuo greta esančių citrinų ir obuolių rūgščių (skiriamoji geba > 1,5).
4. Metodo patvirtinimas
Linijinio diapazono patikrinimas rodo gerą linijinį ryšį tarp smailės ploto ir koncentracijos 10–1000 µg/ml diapazone (R² = 0,9993). Aptikimo riba (LOD), nustatyta signalo ir triukšmo santykio metodu, yra 0,5 µg/ml. Pakartojamumo bandymuose šešių pakartotinių to paties špinatų mėginio nustatymų RSD yra 1,8 %. Dyglių išgavos eksperimentai trimis lygiais (80 %, 100 % ir 120 %) duoda atitinkamai 98,2 %, 102,4 % ir 97,8 % vidutines išgavas, o tai atitinka kiekybinės analizės reikalavimus.
5. Tikrų mėginių analizė
Buvo ištirti šeši komerciškai prieinami vaisiai ir daržovės: špinatai (356 ± 12 mg/100 g), salierai (215 ± 9 mg/100 g), pomidorai (18 ± 2 mg/100 g), obuoliai (6 ± 1 mg/100 g), bananai (neaptikta) ir brokoliai (89 ± 5 mg/100 g). Palyginus su nacionaliniu standartiniu metodu (GB 5009.277-2016), matyti, kad santykinis nuokrypis tarp dviejų metodų yra mažesnis nei 5 %, o tai patvirtina šio metodo patikimumą. Visų pirma, HPLC metodas pasižymi didesniu jautrumu nei tradiciniai titravimo metodai, analizuojant mažo kiekio mėginius.
6. Pagrindinės pastabos
Griežtai kontroliuokite pH vertę mėginio išankstinio apdorojimo metu. Jei ekstrakto pH viršija 3, kalcio oksalato nusodinimas lems žemus bandymo rezultatus. Mobilioji fazė turėtų būti ruošiama kasdien šviežiai, kad būtų išvengta druskų nusodinimo ir kolonėlės užsikimšimo. Po kas 20 injekcijų kolonėlę 30 minučių praplaukite acetonitrilo ir vandens mišiniu (30:70), kad nesumažėtų kolonėlės efektyvumas. Mėginiams, kuriuose yra pigmentų (pvz., purpuriniams kopūstams), prieš injekciją rekomenduojama pridėti kietosios fazės ekstrakcijos gryninimo etapą.
7. Taikymo ir išplėtimo nurodymai
Šis metodas gali būti išplėstas iki oksalo rūgšties aptikimo biologiniuose mėginiuose, tokiuose kaip šlapimas ir kraujas. Koreguojant mobiliosios fazės sudėtį (pvz., pridedant tetrabutilamonio hidroksido), oksalo rūgštis ir jos metabolitai gali būti nustatyti vienu metu. Kartu su masių spektrometrijos detektoriumi galima nustatyti tikslesnį pėdsakų aptikimo metodą. Maisto perdirbimo pramonėje šis metodas gali suteikti svarbių duomenų, skirtų mažai oksalo rūgšties turinčių veislių pasirinkimui ir gaminimo procesų optimizavimui.
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. – Oksalo rūgštis
„Zibo Anhao Chemical Co., Ltd.“ yra patikima aukštos kokybės oksalo rūgšties (pramoninės klasės, ne mažiau kaip 99,6 %) tiekėja ir eksportuotoja iš Šandongo, Kinijos. Mūsų oksalo rūgštis yra balta kristalinė kieta medžiaga, dar žinoma kaip etandirūgštis, kurios molekulinė formulė yra C₂H₂O₄. Ji pasižymi dideliu grynumu, mažu priemaišų kiekiu ir stabilia kokybe visose partijose, todėl atitinka tekstilės, odos, metalurgijos, retųjų žemių apdorojimo, cheminio valymo ir statybos pramonės poreikius.
Mes tiekiame tiek bevandenę, tiek dihidratinę oksalo rūgštį, supakuotą 25 kg, 50 kg ir 1000 kg biriems maišams. Griežtos kokybės kontrolės procedūros, išsamios bandymų ataskaitos ir lankstūs tiekimo planai užtikrina stabilų tiekimą ir nuoseklų našumą pirkėjams visame pasaulyje. Mūsų produktai yra plačiai eksportuojami į Pietryčių Aziją, Europą, Afriką ir Ameriką, pelnydami pripažinimą dėl patikimos kokybės ir konkurencingų kainų.
Rinkitės „Zibo Anhao Chemical“, jei norite patikimo oksalo rūgšties tiekimo ir profesionalių cheminių medžiagų tiekimo paslaugų iš vienų rankų.
Rinkitės „Zibo Anhao Chemical“, jei ieškote itin grynos oksalo rūgšties, užtikrinančios stabilų našumą ir vertę jūsų verslui. Susisiekite su mumis dėl didmeninių užsakymų arba techninių specifikacijų: info@anhaochemical.com
